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緩沖液在實驗中的作用十分強大,由上于緩沖液的類別非常多,所以我們常會看到某某緩沖液的配制方法有哪些或者是一些使用方法等,但其他在選擇上,也是十分重要,其作用主要是緩沖作用,而這種作用的前提是基于溶液,固有的時候也會被稱為:緩沖溶液!
緩沖液的品種非常多,比如常見的有HEPES緩沖液,磷酸鹽緩沖液,Tris緩沖液,甘氨酸緩沖液,雖然我們都知道這些緩沖液有很多的優點,但同時也有著不可避免的缺點;本文將為您一一進行揭曉,我們只有把這些問題弄清楚了,才可以更加清楚的去選擇適合的緩沖液。
一般來說,在選擇緩沖液時,我們需要遵循以下幾個要求,特別是需要確定該緩沖液所需的PH值,具體如何選擇請參考下面說明:
選擇緩沖體系,其解離常數pKa值應該在設定的pH上下一個pH值單位內,因為緩沖液的pKa變化超過一個pH單位時,其緩沖能力就會明顯下降;
緩沖體系不應影響蛋白質的活性或者DNA的穩定性,并避免其他離子的干擾;
最后,還要考慮溫度的影響:溫度不僅對緩沖液有影響,對細胞也有影響,大多數動物細胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5,而在溫度下降到0℃時可達到8.0。
那么緩沖液有什么優點及缺點有哪些呢?由于緩沖液的品種特別多,所以我們拿出幾個系列的產品作詳細講述!
磷酸鹽緩沖液是使用廣泛的一種緩沖劑,由于它有二級解離,所以緩沖的pH值范圍很廣,可配置各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液。
A、優點
易配成各種濃度
適用pH范圍寬
pH受溫度影響小
稀釋后pH變化小
B、缺點
易與常見的鈣離子、鎂離子及重金屬離子締合成沉淀
Tris緩沖液是在生物化學研究中使用較廣泛的一種緩沖劑,其本身為弱堿,常用有效pH在“中性”范圍。
A、優點
堿性較強,可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的但范圍pH緩沖液;
對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀。
B、缺點
pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1
溫度效應大,如4℃時pH=8.4,37℃時pH=7.4
易吸收空氣中的二氧化碳
HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH7.2~7.4范圍內具有較好的緩沖能力,常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
A、優點
在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的pH值,并對細胞無毒性作用。
B、缺點
在高濃度時對一些細胞可能有毒,與其他緩沖劑相比價格略貴。
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